水質汚濁に係る環境基準の見直しについて

2021/11/24

令和3年10月7日に環境省より、「水質汚濁に係る水質環境基準の見直し」について告示がありました。
この告示により、人の健康の保護に関する環境基準のうち、「六価クロムの基準値」と「大腸菌群数に係る環境基準」が見直しとなり、令和4年4月1日に施行となります。
「大腸菌群数に係る環境基準の見直し」については、衛生微生物指標が大腸菌群数から大腸菌数に改正となります。

改正後の「メンブランフィルター法を用いた大腸菌数検査」の概要と、大腸菌検査に必要な酵素基質培地および関連製品を以下の通りご案内いたします。

メンブランフィルター法を用いた大腸菌数検査の概要

大腸菌群数に係る環境基準の見直しについて

下記記載内容は、水質汚濁に係る環境基準（環境省告示第59号）、水質汚濁に係る環境基準の見直しについて（お知らせ）令和3年10月7日、前記お知らせの別紙　改正概要を要約したものです。

	従来	改正後
測定項目	大腸菌群数	大腸菌数
測定方法	最確数による定量法	メンブランフィルター法
背　景	大腸菌群数では、ふん便汚染を的確に捉えられていない。大腸菌群数は、その測定値にふん便汚染のない水や土壌に分布する自然由来の細菌をも含んだ値が検出されると考えられる。	大腸菌数は、従来指標より的確にふん便汚染を捉えることができる。
背　景	環境基準制定当時、大腸菌のみを簡便に検出する培養技術がなかった。	現在は簡便な大腸菌の培養技術が確立されている。

測定方法の比較

手順	従来法(最確数による定量法)	改正後(メンブランフィルター法)
事前準備	使用培地（BGLB発酵管）の準備	計量器具・ファンネルなどの滅菌使用培地（特定酵素基質寒天培地）の準備希釈水の準備
検水/培養	試料は、10ml、1ml、0.1ml、0.01ml・・・のように連続した4段階を5本ずつ用意する。試料は、その最大量を移植したものの全部か又は大多数が大腸菌群陽性となるように、また最少量を移植したものの全部か又は大多数が大腸菌群陰性となるように適当に希釈して用いる。各資料をBGLB醗酵管に移植する。 35～37℃、48±3時間培養する。	検水量は100mlとし、メンブランフィルター上のコロニー数が100を超えると予想される場合は、コロニー数が20～100個程度となるよう、10倍や100倍など10倍ごとの数段階の検水を調整する。メンブランフィルターをファンネルに固定し、検水を吸引ろ過する。検水をろ過したメンブランフィルターを培地に密着させる。 37℃で24時間程度培養する。
判定/計測	ガス発生が確認された試験管数を数える。試料100ml中の最確数を最確数表を用いて算出する。	フィルター上の青色コロニーを数える。試料100ml中の大腸菌数(a)を次式から算出する。　　a = (m / V) × P × 100 　　　m：フィルター上の大腸菌コロニー数　　　V：ろ過に用いた検水量(ml) 　　　P：希釈倍率
備考	試料採取後、直ちに試験ができないときは、冷蔵して数時間以内に試験する。	試料採取後、直ちに試験ができないときは、0～5℃の暗所に保存し、9時間以内に試験することが望ましく、12 時間以内に試験する。

特定酵素基質寒天培地：
酵素基質として「５－ブロモー４－クロロー３－インドリルーβーDーグルクロニド（X-GLUC）」を含む。
大腸菌が特異的に産生するβ-グルクロニダーゼと、酵素基質 X-GLUC が反応して青色を呈する。

メンブランフィルター法　関連製品のご案内

酵素基質培地

クロモアガーECC は、食品や環境検体中の大腸菌・大腸菌群を検出するための酵素基質培地です。
培地に含まれる特殊酵素基質 X-GLUC により、大腸菌は青色に発色します。大腸菌以外の大腸菌群は赤色に発色し、大腸菌と大腸菌以外の大腸菌群を明瞭に区別することができます。

製品番号	製品名	包装
08402-67	クロモアガーECC	1L用
49958-16		5L用
49958-17		25L用
717723-4		400mL用×40
717606-4	スタンプマン　クロモアガーECC	10枚×4包

メンブランフィルター

メンブランフィルター法による大腸菌数検査に必要な、直径 47 mm、孔径 0.45 μmの円形の滅菌済みメンブランフィルターを様々な包装で取り揃えております。使用量に応じてお選びください。

＜メーカー：PALL ＞
製品番号	製品名	包装
97002-01	GN-6メトリセルメンブレン滅菌済S-PACKS 47mm-0.45μm グリッド付	200
97002-02	GN-6メトリセルメンブレン滅菌済S-PACKS 47mm-0.45μm グリッド付	1000
97002-03	GN-6メトリセルメンブレン滅菌済S-PACKS 47mm-0.45μm グリッド付	2000
97011-04	GN-6メトリセルメンブレン滅菌済 47mm-0.45μm グリッド付	200 × 5

メンブランフィルターろ過装置

マイクロファンネル（97002-30）とビバレッジモニター（97007-00）は、ファンネルとフィルターが一体化したガンマ線滅菌済みのディスポタイプ製品ですので、大量のサンプル処理に最適です。

マグネチックフィルターファンネル（97002-50・97011-07）は、ガラス製ファンネルに比べ安全に取扱いがでます。独自のマグネチックシールにより片手で簡単に操作ができることに加えて、ピンセットによる取り出し口がありフィルターの回収を容易に行うことができます。また、マグネチックフィルターファンネルはオートクレーブ滅菌も可能です。

＜メーカー：PALL ＞
製品番号	製品名	包装
97002-30	マイクロファンネルフィルターファンネル GN-6メトリセルメンブレン滅菌済 0.45μm 100mlLグリッド付個別包装	50
97007-00	マイクロチェックII ビバレッジモニター GN-6メトリセルメンブレン 0.45μm 100mLグリット付滅菌済	50 個包装ではありません
97002-50	47mmマグネチックフィルターファンネル 150mL （マニュホールド用ゴム栓付）	1
97011-07	センティーノ 47mmマグネチックフィルターファンネル 150mL・アダプター無し（センティーノポンプ用）	1
97011-11	センティーノ用アダプター（センティーノポンプとセンティーノマグネチックフィルターファンネル接続用）	1

マニホールド

耐薬品性に優れた３１６Lステンレススチール製のマニホールドは、工具を使わず分解と組立が可能です。アダプターを交換すると様々なファンネルが使用できます。また3連マニホールドを連結^※すると6連マニホールドとしても使用できます。
※マニホールドの連結には、別売の「マニホールド用カップリングデバイス（97011-32）」が必要です。

＜メーカー：PALL ＞
製品画像	製品番号	製品名	包装
画像は標準アダプター（別売）を装着した状態です	97011-26	3連ステンレス製マニホールド	1
	97011-27	マイクロファンネル用アダプター	3
	97011-30	標準アダプター（ゴム栓用）	3
	97011-32	マニホールド用カップリングデバイス	1